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[帮助]WB的样品负荷应该是多少?

2019-06-10 10:26
[帮助]WB的样品负荷应该是多少? [帮助]WB的样品负荷应该是多少?
大家好。我是蛋白质印迹,提到组织,样品浓度也比较大,请问样品量一般应该更好?
由于这一点,样品量与目标蛋白质的量有关。由于组织比细胞污染更严重,样本体积相对较大,通常为30至70微克,超过100微克。
请参阅此出版物。这取决于您正在制作的蛋白质的量。DAB通常为50至100μg,ecl为20至40μg。
然而,取决于蛋白质表达的量,靶蛋白质的绝对量为至少50pg并且ecl方法为至少20pg。
我也将这种组织用作西方组织,但蛋白质浓度非常高。
我通常需要50-100微克。
如果蛋白质浓度过高且负荷过低,可以用裂解液稀释蛋白质,使总加载量为10μl。不要用水稀释来改变pH值。
请不要放太多负荷。否则条带将是一个大问题,看起来很糟糕。
具体而言,如果内部标准在测试后未经测试,则有必要确定目标蛋白质不存在,由于目标蛋白质丰度低,试图增加样品量的相对较小这可能表明它不够。样品费
当然,没有获得目标蛋白质的原因有很多:)这只是从加载的角度考虑。
好吧,谢谢你几天前预测我,但有一个条带。我计算它为150-160微克。我可以问你是否可以增加这么高的金额?
重要的是在实验前分析自己的结果,最后使背景条更清晰,密度更小。
事实上,不要害怕进行实验,因为WB控制最终表明底部条带不仅可以控制样品电荷量,而且可以控制整个WB过程的许多部分。在实验结束时进行更多关于浓缩剃须的实验。这比后者好。
还有一些其他人无法帮助您回答的金额。
无论它是什么,关键是得到它并逃脱地带。
如果你只能使用160微克,请使用160微克。
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